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如何制备pbmc
先从制备pbmc开始吧。 我们的原理是利用梯度密度离心法制备。 血浆、pbmc和红细胞等的密度不同，加上淋巴细胞分离液，离心后全血分层，拿到上清液。 +90%胎牛血清），后置于冻存管中 各取10ul液体，计数，看细胞活度，一般来讲细胞数量能达到106，细胞活度能90%以上 将冻存管置于梯度冻存盒中，放到-80℃冰箱 注意事项： 抽取的外周血，应尽快制备
2.6K20发布于 2021-01-18 - 来自专栏生信修炼手册
肿瘤新抗原简介
肿瘤免疫治疗是一个近年来研究得非常火热的领域，取得了多项突破性的进展，免疫检查点抑制剂PD-1/PD-L1抗体在晚期实体瘤患者的治疗中取得了明显收益，嵌合抗原受体T细胞疗法CAR-T在血液肿瘤的治疗上也疗效显著 肿瘤疫苗是通过机体识别肿瘤特异性抗原（tumor specific antigen,TAS)或者肿瘤相关抗原（tumor associated TAA）来激活抗原呈递细胞，引起特异免疫应答反应来杀伤肿瘤细胞 TSA也称之为肿瘤新抗原neoantigen, 是由肿瘤细胞的体细胞变异产生的一种异常蛋白。 新抗原通过MHC分子结合，从而被T细胞受体T-cell receptor(TCR)识别，引发免疫应答反应。 结合NGS和生信分析，可以快速预测肿瘤新抗原。 在进一步结合体外实验验证，筛选阳性的新抗原。 随着肿瘤新抗原检测和预测技术的不断发展，基于新抗原的免疫治疗也取得了突破性进展，在后续文章中会详细介绍相关软件的使用。
1.3K20发布于 2019-12-19 - 来自专栏芯片工艺技术
ＣＶＤ制备钻石
这种技术又是如何能制备出强度那么大的钻石呢。 前天开会提到一个ＣＶＤ diamond package 的概念，就是利用金刚石的导热率高的特性做芯片封装，采用CVD的工艺沉积出钻石。 制备金刚石的CVD是一种叫MPCVD的设备： 20世纪90年代，CVD合成单晶体钻石的研发取得显著进展。
79210编辑于 2022-06-08 【免疫学实验】单克隆抗体技术
原因： 即使是针对单一抗原决定簇（如半抗原）产生的抗体，其结构也存在差异（异质性）。这可以通过等电聚焦实验验证：识别相同抗原的抗体在电泳后会显示出不同的等电点，证明其分子结构的不均一性。 人源单克隆抗体的现代制备 虽然杂交瘤技术主要应用于小鼠，但目前治疗性的人源单克隆抗体主要通过以下基因工程技术制备： 噬菌体展示技术 重组 DNA 技术（克隆人浆细胞抗体基因） 携带人类抗体基因的转基因小鼠 每一个噬菌体都在表面表达不同的抗原结合域，一系列这样的噬菌体总和起来被称为噬菌体展示库。可以用亲和层析法）分离在噬菌体展示库中与特定抗原结合的噬菌体，所分离的噬菌体颗粒可用于感染新鲜细菌。 以这种方式分离的每个噬菌体都可以产生类似于单克隆抗体的单克隆抗原结合颗粒（图 2）。 从接种过疫苗的个体中产生人单克隆抗体：由于接种过疫苗的个体所产生的抗体已经重排重链和轻链基因序列，所以在某些情况下，可以从这些个体中分离浆细胞来制备人单克隆抗体。
23610编辑于 2025-12-29- 来自专栏芯片工艺技术
GaN HEMT 器件制备工艺
主要工艺有：有源区隔离、源漏极欧姆接触制备，栅极肖特基接触 器件表面钝化、电极互连工艺。
2.5K20编辑于 2022-06-06 - 来自专栏点点滴滴
Western Blot一抗的选择
Western Blot中，一抗是一种非常关键的试剂， 因为仅仅是抗体制备和质检都是一项非常复杂的工作，所以对于Western blot实验人员来说如何选择一抗是一件很有挑战的工作，尤其是不完全了解抗体制备过程的朋友更是头疼 苏州百奇生物科技有限公司（Abgent) 公司有10000多种多抗，几乎所有抗体都用多肽为抗原制备，品牌也还不错。 对于常用的一抗，通常都优先考虑兔子作为host，这是因为: 用兔子制备的抗体亲和力比较高（因为兔子与通常研究的特种在遗传上相差比较大，当然如果本来的目的就是研究兔源抗原那就是另当别论了），另外，相对于其它物种 Immunogen 免疫原，即用来制备抗体选用的抗原，偶联载体的多肽和重组蛋白是用得最多的免疫原，通常情况下，重组蛋白作为抗原得到的亲和力比多肽作为抗原得到的抗体的亲和力高，识别的表位多，即使抗原上大部份表位被掩盖或被破坏它们都能很好地识别 其实免疫原是蛋白还是偶联的多肽更好，这个问题和前面提到的选择多抗还是单抗原则是一回事，这里就不再废话了。另外，关于抗原的更多基础知识可以参考本站的“抗原制备”一部份。
7.1K53发布于 2018-06-26 - 来自专栏Chris生命科学小站五年归档
【CAR-T】国自然热点研究摘要参考
绕过体外制备及回输的瓶颈，精确调控CAR-T细胞的数量及其作用时间是CAR-T治疗的关键所在。 CAR-T（H2003）-5* 基于CML新型特异性肿瘤抗原及抗体制备CAR-T细胞靶向治疗CML的实验研究 TKI用于CML治疗取得了显著疗效，但TKI只能抑制Bcr-Abl激酶活性，不能根除CML CAR-T疗法最重要的是鉴定特异的肿瘤细胞表面分子靶标及制备相应抗体。我们将CML患者的白血病细胞免疫小鼠，制备了一个CML特异抗体Cam1。 本项目继续开展以下四方面研究：（1）确定Cam1抗体特性；（2）鉴定Cam1抗体靶向的抗原；（3）基于Cam1抗体制备CAR-T细胞靶向治疗CML；（4）阐明抗原在CML中的作用及与Bcr-Abl的关系 ；（3）明确Cam1抗原在CML中发挥的作用，阐明其特异性表达于CML细胞中的机制。
51120编辑于 2023-02-28 - 来自专栏用户7627119的专栏
肿瘤新抗原突变负荷分析
肿瘤新抗原（Neoantigen）是由肿瘤细胞突变基因编码的新生抗原，主要由基因点突变、删除突变、基因融合等产生的与正常细胞表达的蛋白不一样的新的异常蛋白。一般来说，高TMB患者有更多的新抗原。 2.分析方法 （1）新抗原负荷评估 使用突变数据对肿瘤特异新抗原样本过滤，保留个812 Pan-Gyn样本。使用R包maftools对 MAF文件计算 Pan-Gyn NAL。 根据不同的免疫状态选取60%和80%的新抗原负荷区间，获得163个样本的新抗原负荷高（NAL-H）组，161个样本的新抗原负荷中（NAL-M）组，488个样本的新抗原负荷低（NAL-L）组。 新抗原负荷亚组的体细胞突变特征 三、新抗原负荷亚组与临床结果的关系 相比于NAL-M 和 NAL-L，NAL-H的生存最好（图3A）。比较了亚组之间的临床协变量的差异（表1）。 最近一篇论文报道了肿瘤抗原的特异性活性CD8C和CD4C T细胞在免疫治疗中可诱导抗肿瘤反应。辅助T细胞的免疫反应是CD4C T细胞能够识别MHC II抗原，在抗肿瘤活性中发挥重要作用。
3.5K41发布于 2020-08-05 - 来自专栏镁客网
格源致善苏小平：AI助力新抗原预测，解决个性化肿瘤疫苗难题丨镁客请讲
这就是格源致善正在做的个性化肿瘤疫苗，通过基因测序来分析肿瘤的突变，然后预测、设计、制备针对突变基因的新生抗原疫苗，疫苗回输患者体内进而激发患者自身免疫以杀伤肿瘤细胞。 肿瘤个性化疫苗方案最关键的核心便是对新生抗原（独特存在于癌细胞中并且具有免疫原性）的预测，因为并不是所有的突变都能成为新抗原或者能够制作疫苗，因为影响基因突变成为新生抗原的因素很多：包括它是不是非同义突变 据了解，整个个性化肿瘤疫苗的制造过程包括患者肿瘤组织取样、基因测序、突变分析、新生抗原的预测分析和选择、疫苗设计制备以及评估，最后是临床回输，当疫苗进入到病人体内，肿瘤疫苗被抗原递逞细胞进行吞噬，诱导T 据了解，围绕肿瘤的个性化疫苗治疗，格源致善开发了两个系统：TumorNeo™新生抗原AI预测优选系统和TumorVac™新生抗原体外高效评测系统，分别用于新抗原预测和个性化肿瘤疫苗的体外评估。 对患者进行取样进行基因检测后，他们发现了有500多个基因突变，用TumorNeo™新生抗原AI预测优选系统进行新生抗原预测最后从中挑选出了13个新生抗原进行相关疫苗的制备，疫苗回输治疗七个月后，检测发现该患者的肿瘤有缩小的趋势
1.2K40发布于 2019-05-22 - 来自专栏单细胞天地
人-胃癌旁组织悬液制备
注 | 以上操作指南中涉及的消化酶以及实验方法仅供参考，实际应用过程中请根据具体情况进行细节上的调整。
55430发布于 2021-11-04 MCE干货分享：一抗二抗选择小技巧，不同实验对抗体的要求
抗体 (Antibodies)，又称为免疫球蛋白 (Immunoglobulin, Ig): 由 B 细胞增殖分化而来的浆细胞合成并分泌，能够特异性识别与结合抗原。 为了提高抗体的特异性，通常使用针对高特异性序列的合成多肽作为抗原进行制备。IP/ChIPIP 实验需要抗体能够识别抗原的天然构象，以便结合并沉淀抗原。 因此，制备 IP 抗体时，最佳选择是使用纯化的天然蛋白或重组蛋白作为抗原来源。 这些抗体能够识别活细胞表面或细胞内的抗原，为活细胞提供准确和可靠的信息。对于经过固定处理的流式分析，要求和 IF/IHC 实验中所用的抗体一致。 同理适用于 IP 的抗体不一定适用于 WB；适用于 IHC-P (抗原修复) 的不一定适用于IHC-F (不修复)。Q: 抗体说明书上面没有写该抗体能够用于某项实验怎么办？
66610编辑于 2025-08-29Cathepsin F His Tag 蛋白：结构与功能研究的关键工具
CathepsinF在细胞内主要参与抗原提呈、细胞凋亡调控、细胞外基质重塑等生理过程，其表达异常与多种疾病状态相关，包括神经退行性疾病、肿瘤转移和自身免疫性疾病等。 二、CathepsinFHisTag蛋白的技术优势CathepsinFHisTag蛋白是通过基因工程技术制备的重组蛋白，在设计和功能上具有显著优势：1.高效纯化特性：C端或N端融合的6×His标签可与镍离子亲和层析柱高效结合 4.多功能应用：既可用于酶学性质研究，也可作为抗原用于抗体开发，或作为标准品用于活性测定。 -免疫调节功能：研究其在抗原提呈细胞中对抗原处理的影响及其在自身免疫反应中的作用。3.药物开发应用-药物靶点验证：作为治疗靶点用于新型抑制剂的设计和优化。 四、实验方法与优化策略1.蛋白制备流程-表达系统选择：哺乳动物表达系统可获得最接近天然的糖基化修饰，大肠杆菌系统则适用于大规模制备。
12410编辑于 2026-02-06细胞免疫疗法TCR-T和空间VDJ测序
TCR-T疗法TCR-T (T-cell receptor-engineered T cells) 通过基因导入方法，将抗原特异性TCR导入患者T细胞，制备人工TIL。 由于TIL数量较少，不是任何肿瘤组织中都存在，于是科学家们想到了制备工程化TIL，也即是当前TCR-T的前身。与CAR-T相比，TCR-T不仅能够靶向细胞表面蛋白质，还可以靶向胞内蛋白质。 TCR-T制备过程 与CAR-T细胞疗法相似，TCR-T技术在发展过程中也经历了四次迭代： 第一代TCR-T是从患者T细胞中分离出肿瘤抗原特异性识别的T细胞亚群，经体外扩增后回输治疗。 目标抗原的选择人类肿瘤抗原主要可分为两类——肿瘤特异性抗原（例如，新抗原和病毒抗原）和肿瘤相关抗原（例如，癌症/睾丸（CT）抗原、过表达抗原和分化抗原）。 TCR基因治疗中考虑的其他肿瘤特异性抗原包括突变抗原和新抗原，其中大多数是安全的靶标，因为它们在肿瘤细胞中特异性表达。突变抗原在许多肿瘤类型中广泛表达，并且由于其个体化特征，可以通过测序获得新抗原。
46221编辑于 2024-02-18- 来自专栏单细胞天地
培养细胞单细胞悬液制备
活体体内细胞当离体置于体外培养时大多数以贴壁方式生长，主要包括正常细胞（例如：成纤维细胞、巨噬细胞、神经胶质细胞、心肌细胞以及肝、肺、肾、乳腺、皮肤细胞等）和肿瘤细胞，一般用胰酶消化；临床上常见的脱落细胞经过简单离心过筛处理就能制备成单细胞悬液
1.1K30编辑于 2022-03-14 AbMole详解： DNP-BSA--免疫学研究与检测的得力助手
一、作为免疫原制备抗体DNP-BSA（M58157，AbMole，2,4-二硝基苯基-牛血清白蛋白）常被用作免疫动物的免疫原，以制备抗 DNP 的特异性抗体。 这些抗体可以用于后续的免疫学实验，例如检测抗原抗体反应、研究抗体的特异性和亲和力等。 然后在一定时间后，通过静脉注射DNP-BSA进行抗原挑战，以诱导过敏反应。 四、免疫检测和免疫层析免疫层析技术是一种基于抗原抗体特异性反应的膜检测方法。它以硝酸纤维素膜为固定相，该膜上固定有检测线（包被抗体或抗原）。 在流动相的作用下，待测物首先与荧光标记的抗体或抗原结合，随后在到达检测线时与包被的抗体或抗原结合，形成荧光或胶体金条带，从而实现检测目的。
15610编辑于 2025-11-19- 来自专栏生信修炼手册
人类白细胞抗原-HLA简介
HLA 全称human leukocyte antigen, 表示人类白细胞抗原，是编码主要组织相容性复合体(MHC)的基因，位于6p21.31的区域，包含了一系列紧密连锁的基因座。 根据基因产物的结构，功能，细胞分布等因素，将HLA基因分成了3大类：HLA-I型基因，包括了HLA-A, HLA-B，HLA-C等经典的抗原基因，还有一些假基因；HLA-II 型基因，其编码产物都是双链蛋白质 代表基因名称，前缀和基因名称之间用短横线连接；*星号作为分隔符，分隔符之后是同一个基因的不同allel, 由冒号分隔的多个部分构成，最多包含4个部分，第一组02代表不同的血清学类型，根据血清学鉴定的结果对不同抗原进行分类
2K10发布于 2020-05-11 - 来自专栏单细胞天地
人-结肠肿瘤细胞悬液制备
注 | 以上操作指南中涉及的消化酶以及实验方法仅供参考，实际应用过程中请根据具体情况进行细节上的调整。
71010发布于 2021-12-02 - 来自专栏纳米药物前沿
马光辉Sci Adv：自愈微囊开创肿瘤疫苗制备的新方法
特殊的自我修复功能为抗原微囊提供了温和而有效的范例。接种疫苗后，这些微囊可在原位形成良好的免疫微环境，其中抗原释放动力学，募集的细胞行为和酸性环境以协同方式起作用。 抗原分子以扩散后的方式有效地装载到了基于聚乳酸（PLA）的微球中，并且通过温和的密封过程，表层的毛孔能够愈合，从而产生了装载抗原的微囊。接种疫苗后，这些微囊保留在注射部位并形成抗原库。 伴随着微囊的降解，由于协调一致的持续抗原释放和抗原提呈细胞（APC）募集，抗原持续内化。 作者首先使用双乳液法制备了微球，其中PLA（FDA批准的聚合物）被用作主要基质，而聚（乙二醇）-b-poly-dl -丙交酯（PELA；两亲性聚合物）用作乳化剂。 与传统的预封装方法不同，作者新的后封装方法的关键特征是混合过程简单，抗原不暴露于有机溶剂中以及加工条件温和，从而大大提高了抗原稳定性和负载量。
57220发布于 2021-02-04 - 来自专栏生命科学
ADC 抗体偶联药物通过连接子 linker 连接而成 | MedChemExpress
ADC 药物进入体内后，抗体部分与肿瘤细胞表面的靶向抗原结合 (binding)，肿瘤细胞会将 ADC 分子内吞。 抗 原 理想的抗原一般具有以下几个特点：1. 抗原应该在肿瘤细胞中具有较高表达水平，且在肿瘤组织中具有较低的异质性，而在正常组织中的表达水平相对较低；2. 抗原从细胞上脱落概率小，以防止在治疗循环中药物不能作用于靶细胞；3. MC-Val-Cit-PAB 是可被组织蛋白酶切割的 ADC 连接桥，用于制备抗体-药物偶联物 Drug-Linker Conjugates for ADC: SMCC-DM1 SMCC-DM1 (DM1 -SMCC) 是由连接桥 SMCC 和 毒性分子 DM1 连接而成的，可用来制备抗体偶联药物。
87620编辑于 2023-03-02 - 来自专栏单细胞天地
人—尿液细胞悬液制备流程
注 | 以上操作指南中设计的消化酶以及实验方法仅供参考，实际应用过程中请根据自己的组织样本类型进行细节上的调整
58850编辑于 2021-12-10
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