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- 来自专栏iPSC诱导多能干细胞培养
干细胞培养中的组织解离难题：胶原酶选择、工艺优化与残留控制实践
实际工艺开发过程中，越来越多研究团队倾向于采用包含胶原酶和辅助蛋白酶的复合酶体系，通过不同酶之间的协同作用实现更加温和的组织解离。 研究数据显示，在适宜的消化条件下，优化后的胶原酶体系能够显著降低细胞结团率，并在保证组织解离效率的同时维持较高细胞活率。 Nordmark GMP NB6胶原酶二、为什么按照相同浓度配制胶原酶，消化效果仍然存在差异在实际实验过程中，很多研究人员会发现即使严格按照说明书中规定的质量浓度（mg/ml）配制胶原酶工作液，不同批次之间仍可能出现消化效果差异 三、胶原酶工作液配制过程中容易忽视的关键因素胶原酶属于钙离子依赖性酶类，其活性发挥与体系中的离子环境密切相关。首先，工作液配置过程中应确保缓冲体系中含有足够浓度的钙离子，以维持酶活性。 常见的检测策略包括基于免疫学方法的夹心ELISA检测，通过针对胶原酶的特异性抗体实现定量分析，从而评估最终产品中的酶残留水平。
11510编辑于 2026-06-18 - 来自专栏单细胞天地
人-软骨组织单细胞悬液制备
综上，软骨基质中主要为胶原蛋白，因此，解离过程中，选择胶原酶进行解离。胶原酶提供广泛的蛋白水解活性，能够降解天然胶原和网状纤维，且优先切割细胞膜外的蛋白，基本上可保持细胞完整。 软骨组织图及软骨组织示意图 材料和试剂耗材 1、试剂、仪器耗材 2、酶溶液配制 在标准培养基中配制胶原酶溶液 (1mg/mL)，使其溶解并通过0.45μm和0.2μm注射器过滤器进行无菌过滤。 胶原酶混合物可以新鲜使用或立即冷冻，制备后最多可使用6个月。分装储存，因为冻融循环会失去活性。 实验流程 在PBS中晃动1 min，清洗切割的软骨组织，并重复几次洗涤步骤。 将软骨碎块转移至50 mL管中，管中加入胶原酶消化混合物（10 % v/v 软骨：消化混合物），在37°C振荡（45-60 rpm）孵育软骨-胶原酶混合物12-15 h。
1.2K30发布于 2021-10-20 - 来自专栏聊点学术
【模型】大鼠脑出血动物模型（一）
对于大鼠模型来说，自体动脉血注入和胶原酶-肝素注入是最常用的两种造模方法，但是二者存在一定区别。 ? 二、胶原酶-肝素注入 文献中经常看到此方法。这个原理也比较简单，胶原酶能够分解细胞间质和血管膜胶原蛋白，血管壁受损后局部会渗出血液；同时，肝素又能使血液不凝固，血液逐渐积聚。 胶原酶-肝素的用量对实验结果影响较大。用量少，达不到效果；用量大了，动物容易死亡。 因为厂家的不同，胶原酶-肝素的质量参差不齐。因此，寻找胶原酶-肝素用量与出血效果的平衡，是这个模型的重点。
2K40发布于 2021-01-11 - 来自专栏生命科学
干货分享 | 胶原酶挑花眼？一文教你怎么选!（内含组织解离方法）| MedChemExpress (MCE)
不同类型胶原酶的应用为大家整理在下面啦~表 1. 胶原酶的类型及应用。 图 1. 从固体组织制备单细胞悬浮液的关键步骤[3]。 ▐ 胶原酶配制向 100 mg 胶原酶中加入 4.5 mL HBSS，震荡使其充分溶解， 0.22 μm 滤膜过滤除菌后，立即使用或分装成小份量，于 -20°C 避光冻存，使用前在冰上解冻，避免反复冻融 2、加入足量 HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要的工作浓度，于 37℃ 孵育。表 2. 不同组织样本解离方案。3、已分散开的细胞可使用细胞过滤器/尼龙网筛得，收集备用。 4、使用不含胶原酶的 HBSS 或培养基洗涤收集的细胞数次。5、预冷的细胞培养液重悬细胞[13]。 ▐ 实验技巧MCE 除了胶原酶外，还提供如胰酶、分散酶、重组胰酶消化液等，均可应用于细胞消化及组织解离。 [1] Zhewen Hu,et al.
40610编辑于 2024-07-05 - 来自专栏单细胞天地
人-肾脏组织单细胞悬液制备
该方案中使用4型胶原酶和A型胶原酶混合后的混合酶液。 因为胶原酶提供广泛的蛋白水解活性，但优先切割细胞膜外的蛋白，所以基本上保持细胞完整，此外在消化酶液中，有来自大豆的胰蛋白酶抑制剂，旨在限制胶原酶混合物中胰蛋白酶蛋白的活性（会破坏细胞的完整性）。 除了DNAse外，还有5 mM CaCl2（一种胶原酶活性的激活剂），可以消化死细胞释放的DNA，减少细胞结块。 肾脏组织及组织示意图 材料和试剂耗材 1.仪器耗材 2.胶原酶混合液配制 实验流程 将肾脏组织转移至预冷的PBS缓冲液中。
1.4K40发布于 2021-11-04 - 来自专栏单细胞天地
单细胞测序中小鼠肝脏组织细胞悬液制备流程
小鼠肝脏第一层由0.25%胰蛋白酶在4℃下离解离10min，第二层解离由添加地衣芽孢杆菌酶，胶原酶及DNase I 组成的混合酶。 Thermo·Fisher 14190 胰蛋白酶 Thermo·Fisher 15400054 牛血清白蛋白 无要求 无要求 EDTA final A8806 地衣芽孢杆菌酶 Sigma P5380 4 型胶原酶 将步骤 7 中剩余的组织块加入组织解离酶（5mg/mL，胶原酶 IV 0.8mg/ml，DNase I 0.5mg/ml），置于37℃ 的摇床上 80rpm/min进行解离； 消化 8-12min之后
3.7K30发布于 2021-10-09 - 来自专栏单细胞天地
单细胞测序中人皮组织细胞悬液制备
因此在皮肤组织的解离过程中我们选择使用DispaseⅡ和胶原酶Ⅳ。 加入1.6 mg/ml胶原酶；将其放入37℃，5% CO2培养箱中过夜或者超过12小时孵育。 对真皮细胞重复操作9。 使用移液管收集上清并用孔径100μm的过滤器过滤，收集真皮和表皮中的细胞。 我们可以通过DNAseI和其他类型胶原酶辅助解离降低结团率，或者通过结团细胞团和单个细胞间沉降系数差进行离心沉降，从而获取低结团的细胞悬液。
1.3K10发布于 2021-10-09 - 来自专栏细胞培养
化学成分限定MSC培养基使用指南：储存、培养参数与无血清传代操作规范
对于MSC培养而言，可根据实验需求选择重组胰蛋白酶、重组胶原酶、混合酶制剂或非酶消化液等不同方案。具体选择应结合细胞类型、培养时间以及后续实验需求综合考虑。 图2.NordmarkCollagenase胶原酶2.3常见消化终止方案对于胰蛋白酶体系，可通过特异性抑制剂、无血清终止液或者低温稀释方式实现酶活终止。 对于胶原酶体系，则可采用金属离子螯合剂、金属蛋白酶抑制剂或者低温稀释等方式降低酶活性。不同消化体系对应的终止方式有所差异，应根据消化液组成进行合理选择，并充分评估终止试剂对细胞状态的影响。 本文基于MSC细胞培养、培养基、胶原酶、细胞消化、组织解离等相关应用及公开技术资料整理，仅用于科研信息分享与实验操作参考。
10610编辑于 2026-06-23 - 来自专栏单细胞天地
脑组织单细胞悬液制备流程
脑组织 脑组织示意图 因此，在脑组织解离过程中，我们使用Worthington STEMxyme I和脱氧核糖核酸酶I，Worthington STEMxyme I为组织溶梭菌胶原酶和中性蛋白酶的特殊组合 ，胶原酶能够降解天然胶原和网状纤维，中性蛋白酶通常和胶原酶等结合作为次级酶，只能破坏细胞外基质而不破坏细胞之间的连接，因此主要用于细胞集落的分离和将组织块分解成小块细胞，因为它保持细胞膜的完整性，其温和的蛋白水解作用使酶可以被特异性用于分离原代细胞和次级细胞
2.5K10发布于 2021-10-09 AbMole小课堂丨Neutral Protease II（分散酶II）：从原代细胞分离到类器官传代的重要研究工具
对于结构复杂的组织器官（如肝脏、肾脏、肺脏），Neutral Protease II （中性蛋白酶II，分散酶II，AbMole，M21672）常与其他酶，如胶原酶（Collagenase II，AbMole 以肌肉和骨骼组织为例，Neutral Protease II可联合Collagenase I（胶原酶 I ） 、Collagenase II（胶原酶II） 、Pronase 等酶从上述组织中分离出包括间充质干细胞
30910编辑于 2025-12-04- 来自专栏单细胞天地
人—卵巢组织细胞悬液制备流程
切碎的组织转移到含有胶原酶解离液的50 mL离心管中（10 mL/组织，但这取决于组织的大小）。 拧紧盖子，用封口膜密封。 37 °C 孵育45分钟。每10分钟摇晃一次。
86820发布于 2021-12-02 - 来自专栏单细胞天地
小鼠皮肤组织细胞悬液制备流程
我们可以通过DNAseI和其他类型胶原酶辅助解离降低结团率，或者通过结团细胞团和单个细胞间沉降系数差进行离心沉降，从而获取低结团的细胞悬液。
2.3K20发布于 2021-10-22 - 来自专栏单细胞天地
人-食管组织细胞悬液制备流程
本实验使用两性霉素B清除食管上残留的微生物，胶原蛋白酶消化食管组织，胶原酶提供广泛的蛋白水解活性，但优先切割细胞膜外的蛋白，所以基本上保持细胞完整。
63051发布于 2021-12-02 - 来自专栏单细胞天地
单细胞测序揭示出小鼠后肢发育过程中的细胞异质性和发育轨迹
按照时间点取材，胶原酶消化成单细胞后，冻存1 x 10^6 cells per 500μl in freeze media (80%FBS, 10% DMEM, 10% DMSO), 做单细胞实验的时候再取出
1.1K20发布于 2020-03-30 - 来自专栏单细胞天地
单细胞测序中子宫内膜细胞悬液制备
子宫组织及示意图 实验仪器及耗材 消化液(40mL) ⭐现配现用 20 mL HBBS，300 µL 胶原酶 IV，132 µL透明质酸酶，40 µL DNase1 实验步骤 分离150mg—200mg
74830发布于 2021-10-09 - 来自专栏单细胞天地
骨髓龛中不同细胞群体的关联性及其分化途径
用长骨的研磨和胶原酶 - 分散酶处理的组合制备单细胞悬浮液，然后分选活的CD45- Ter119-（非造血细胞）和CD31-（非内皮细胞）细胞。 由于样本制备过程中使用的胶原酶和分散处理及细胞分选会刺激转录因子表达改变 (van den Brink et al., 2017)。
98720发布于 2020-03-30 MetaGEAR流程：宏基因组探索与研究
今天就来看看这个流程，第一次知道这个流程是在这篇文献，研究的是微生物胶原酶活性。 流程详情 流程包含质量控制、分类学分析、功能注释和基因中心分析工作流程处理宏基因组测序数据。
22510编辑于 2026-03-25- 来自专栏实验盒
MIT与微软联合发布CleaveNet：基于生成式AI的蛋白酶底物预测与从头设计
实验验证 为评估CleaveNet的实际应用能力，研究团队以MMP13（一种与癌症转移、伤口愈合和骨关节炎相关的胶原酶）为目标，设计并合成了95条肽段底物，并通过荧光共振能量转移（FRET）技术验证其切割效率
81500编辑于 2025-03-06 科研助攻｜全面了解肿瘤标志物—基质金属蛋白酶家族 (MMPs) | MedChemExpress (MCE)
根据作用底物以及片断同源性的不同，MMP 家族可以分为六类：(1) 胶原酶; (2) 明胶酶; (3) 溶血素; (4) 基质溶素; (5) 膜型 MMPs; (6) 其他 MMPs。
76110编辑于 2024-10-31AbMole | 全合成纳米纤维水凝胶实现卵巢癌类器官无酶释放
分离流程包括组织剪碎、II型胶原酶消化、过滤去除杂质和红细胞裂解等标准步骤。
14010编辑于 2026-01-15
腾讯云开发者
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