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  • 来自专栏芒果先生聊生信

    慢病毒:肿瘤研究的利器

    (来自吉满生物公众号) 常用的293T细胞转染效率就很高,但是大多数细胞转染效率通常比较低。据芒果本人经验,慢病毒在构建过表达、干扰和敲除方面都是效率极高的,甚至可以用于假病毒包装。 包装细胞 293T细胞。293T细胞生长状态要好,新复苏的细胞最好传代2次以上再用于病毒包装,传代次数超过20次的也不要用。正常情况下,293T细胞为贴壁依赖型成上皮样细胞。 293T细胞:细胞铺板,6孔板按照(6~8)x10^5/孔铺板,一般早上铺板,第二天下午就可以做转染了。 转染体系:pLenti-CAS9-puro,pSPAX2, pMD2G按照4:3:1的比例(2μg,1.5μg和0.5μg)混匀,再与转染试剂混匀加入前天准备好的293T细胞中,钙转或PEI转染,293T 这里,sgRNA library载体一般是带有荧光蛋白的,用293T细胞包装病毒或感染靶细胞时,都是可以在显微镜下看到荧光的,亮瞎眼的那种亮。 ? 前两步实验完成。注意冻存细胞。

    2.1K10发布于 2020-08-04
  • 来自专栏芒果先生聊生信

    HEK293细胞系,最全总结

    293细胞的衍生细胞可分为数种,比如293T细胞,293A细胞,293E细胞,293FT细胞等等。有网友总结说,293A是用来包腺病毒的,293T是用来包慢病毒的。 293T细胞由HEK293细胞衍生而来,是SV40 large T抗原稳转得到的细胞株,贴壁不牢。 293T细胞还表达E1A蛋白,SV40 large T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。293T细胞容易转染,用磷酸钙、PEI或脂质体转染,效率均可达90%以上。 293T/17细胞是293T细胞中共转染pBND和pZAP质粒而获得的具有G418耐受的细胞系。该细胞系仍保留高转染效率的特点。 293T/17SF细胞是在293T细胞中转入EBV基因形成的转化细胞系,该细胞系主要用于瞬时转染及蛋白表达,类似于293E细胞的作用。

    7.5K20发布于 2020-08-28
  • 来自专栏芒果先生聊生信

    芒果实验室,293细胞背景

    293细胞的衍生细胞可分为数种,比如293T细胞,293A细胞,293E细胞,293FT细胞等等。有网友总结说,293A是用来包腺病毒的,293T是用来包慢病毒的。 293T细胞表达 E1A蛋白,S40大T抗原,含有S40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。293T细胞容易转染,用磷酸钙、PEI或脂质体转染,效率均可达90%以上。 The 293T cell line was created in the laboratory of Michele Calos by transfection of a sub-line of adenovirus-immortalized

    1.8K20发布于 2020-06-28
  • 来自专栏芒果先生聊生信

    芒果实验室,293细胞培养

    293T细胞表达 E1A蛋白,S40大T抗原,含有S40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。293T细胞容易转染,用磷酸钙、PEI或脂质体转染,效率均可达90%以上。 The 293T cell line was created in the laboratory of Michele Calos by transfection of a sub-line of adenovirus-immortalized

    1.2K30发布于 2020-06-28
  • 来自专栏细胞培养

    PEI转染试剂在293T、Expi293与CHO-S蛋白抗体瞬转中的应用:PEI MAX、Transporter 5与MAXgene GMP技术解析

    PEI(聚乙烯亚胺)作为经典阳离子聚合物转染试剂,因成本可控、操作相对简便、适合放大,并且可用于多种主流表达细胞系,长期应用于HEK293、293T、Expi293、CHO-S等细胞体系。 关键词: Polysciences、Kyfora Bio、PEI转染试剂、PEI MAX、PEI 25K、Transporter 5、MAXgene GMP、293T转染、Expi293瞬转、CHO-S 第一,PEI转染体系对主流表达细胞系具有较好适配性,在HEK293、293T、Expi293和CHO-S等细胞中均可用于蛋白抗体表达或载体构建。 PEI MAX则属于更常用于蛋白表达和载体构建的线性PEI产品,水溶性和配制便利性更好,常用于HEK293、293T、CHO以及悬浮表达体系。 六、293T贴壁细胞转染流程与关键控制点293T等贴壁细胞常用于慢载体构建、AAV载体构建以及部分蛋白表达实验。贴壁细胞转染前的核心要求是细胞状态良好、密度适中、汇合度合适。

    13910编辑于 2026-05-13
  • 来自专栏细胞培养

    Polysciences PEI转染优化指南:293T、Expi293F与CHO-S瞬时转染效率及蛋白表达提升策略

    本文围绕Polysciences25kDa线性PEI与PEIMAX(40kDa)体系,对293T、Expi293F以及CHO-S细胞中的PEI转染优化策略进行系统整理,包括细胞状态控制、DNA质量要求、 因此,对于293T、Expi293F以及CHO-S等常用表达体系而言,建立稳定且可重复的PEI优化流程,往往比单纯更换转染试剂更重要。 六、不同细胞体系的PEI优化流程参考HEK293T贴壁细胞优化流程293T体系通常适用于快速蛋白表达以及病毒包装实验。转染时推荐细胞汇合度保持在70-80%,并尽量避免细胞过度融合。 一般推荐:DNA:PEI=1:3转染后18-24小时换液72-96小时收样对于部分耐受低血清体系的293T细胞,也可尝试不换液培养,以减少操作波动。 目前,PolysciencesPEI以及PEIMAX体系已经被广泛用于293T、Expi293F以及CHO-S等表达平台,并在工业级瞬时表达与科研实验中积累了大量应用经验。

    9410编辑于 2026-05-18
  • 来自专栏用户7627119的专栏

    XYZeq:一种空间可辨的单细胞RNA测序揭示了肿瘤微环境中的表达异质性

    研 究 结 果 01 XYZeq技术生成空间解析的scRNA-seq库 通过人类293T细胞和小鼠的3T3细胞混合物沉积到芯片中,创建不同的细胞比例梯度。 经过计算去除污染和碰撞数后,得到293T细胞共939个独特的分子标识符(UMIs)和439个基因,以及3T3细胞共816个UMIs和336个基因。 如前所述流程图,将小鼠肝组织固定冷冻在芯片上,同时将人的293T细胞沉积到芯片上作为混合物种的内部控制。 并且观察到293T细胞分布在整个组织中,而小鼠细胞则分布在组织的边界处。

    92530编辑于 2022-09-21
  • 来自专栏单细胞天地

    单细胞测序揭示出小鼠后肢发育过程中的细胞异质性和发育轨迹

    测序 使用10X Genomics,将四个时间点的样本分别和培养的人源293T细胞1:1混合, 检测单细胞的捕获率。

    1.1K20发布于 2020-03-30
  • Nat. Commun. | AI 助力揭示蟾毒灵作为 ERα 分子胶降解剂逆转他莫昔芬耐药乳腺癌机制

    特异性验证(Biotin pulldown实验):合成生物素标记的蟾毒灵(Biotin-Bufalin),在293T细胞(过表达ERα)和MCF-7细胞(内源性ERα)中进行下拉实验,结果显示Biotin-Bufalin CYP17A1 蛋白的结合信号,数据表明蟾毒灵与 ESR1 的结合亲和力最强(KD=5.42E-06 M);d、e 为生物素 - 蟾毒灵(Biotin-Bufalin)下拉实验结果,分别在转染 ERα 质粒的 293T 丙氨酸扫描突变验证:构建ERα单点突变体(Leu354A、Leu387A、Arg394A、Met528A、Ala350Q),在293T细胞中进行Biotin pulldown实验,结果显示仅Arg394A 模拟后,通过 MM-GBSA 能量计算和残基能量分解得到的前 10 个关键作用残基;c 为对这 10 个残基进行丙氨酸扫描突变的设计方案;d 为下拉实验结果,在转染 ERα 野生型(WT)或突变体质粒的 293T ERα依赖性验证:siRNA沉默ERα后,蟾毒灵诱导的细胞凋亡率下降50%以上,增殖抑制效应显著减弱;而过表达ERα的293T细胞对蟾毒灵的敏感性显著增强(IC50降至10 nM)。

    28610编辑于 2026-01-08
  • 来自专栏纳米药物前沿

    Journal of Nanobiotechnology: 靶向S蛋白CAR-T细胞来源的纳米囊泡在COVID-19治疗中的应用

    a) 在不同 MOI 下使用S蛋白假病毒感染293T 和293T-ACE2细胞。 b-e) 不同纳米囊泡(外泌体)中和S蛋白时的IC50。 图 5. e) PBS、Free NVs、remdesivir、remdesivir-free NVs 和 remdesivir-CR3022/B38 NVs 分别与 293T 或 293T-S 细胞共同孵育,然后进行钙黄绿素

    69210编辑于 2022-08-15
  • 来自专栏代谢检测试剂盒推文

    线粒体功能研究没方向?Elabscience 线粒体通透性转换孔mPTP检测试剂盒覆盖多疾病机制与药物筛选!

    验证数据展示通过在293T和Hela细胞中分别进行流式细胞仪和荧光显微镜检测,结果显示试剂盒能够清晰区分mPTP的开放状态。

    24810编辑于 2025-11-25
  • 来自专栏技术文章

    荧光强度直观量化!Elabscience 新品mPTP 试剂盒让线粒体功能检测更精准高效

    验证数据展示通过在293T和Hela细胞中分别进行流式细胞仪和荧光显微镜检测,结果显示试剂盒能够清晰区分mPTP的开放状态。)

    32610编辑于 2025-11-24
  • AbMole小讲堂丨BAY 11-7082:经典NF-κB抑制剂,在肿瘤、免疫学和代谢研究中的应用

    实验人员使用TALEN和CRISPR技术编辑了三种不同细胞系(293T、HepG2 和 PANC1)中 NF-κB 家族的五个基因(RELA、RELB、CREL、NF-κB1、NF-κB2),以实现ZsGreen

    31010编辑于 2025-11-14
  • 来自专栏生命科学

    抗真菌新策略:抑制线粒体磷酸盐转运 | MedChemExpress

    通过图1c可以看出 ML316 对 azole 耐药的白色念珠菌展现出了更大的杀菌活力,并且其对细胞株:293T、HepG2 的毒性远远小于抗霉素(图1d)。

    40810编辑于 2023-02-07
  • 来自专栏生信技能树

    lncRNA组装流程的软件介绍软件推荐之DEseq2

    condition table sample_df <- data.frame( condition = c(rep("ctrl",2), rep("KD",2)), cell_line = "<em>293T</em>

    1K50发布于 2021-07-06
  • 来自专栏DrugOne

    J. Med. Chem. | TarIKGC - 一种基于知识图谱补全与多模态特征融合的创新靶标识别计算工具

    此外,与现有抑制剂CVT-313相比,这两个化合物对多种癌细胞系均表现出竞争性的抗增殖活性,同时对非癌细胞系(如THLE-2和293T)的毒性较小,这为平衡化合物的疗效和毒性提供了一个潜在的治疗窗口。

    40100编辑于 2025-02-18
  • 来自专栏生信课程note+实验知识

    实验知识-230910

    细胞间:质粒 DNA 和其他包装质粒共转染细胞(293T 细胞)产生病毒,即为病毒包装。 293T 细胞是由 293 细胞派生, 表达 SV40 大 T 抗原的人肾上皮细胞系, 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白, 或是用以包装病毒。

    2.4K30编辑于 2023-09-10
  • 来自专栏智能生信

    Sci. Advances | 基于深度生成模型和on-chip合成的全新药设计

    如图3B,在用HEK(human embryonic kidney) 293T细胞进行的杂交Gal4报告基因试验中,对化合物1-28进行了LXRα和LXRβ激活的初步测试,化合物1-17 的反应混合物显示出

    1.1K31发布于 2021-06-24
  • 来自专栏DrugOne

    Nat. Mach. Intell. | 5′ UTR语言模型:开辟蛋白质表达预测与优化的新途径

    研究团队收集了来自人类、小鼠、大鼠、鸡和斑马鱼的214,349个5′ UTR序列,以及来自人类肌肉组织、PC3前列腺癌细胞系和HEK 293T细胞系的三个独立数据集。

    1.2K10编辑于 2024-04-12
  • 来自专栏生信宝典

    实验和检测技术带来的高假阳性乌云:6mA是否真的在哺乳动物中广泛存在?

    个真核生物样本和2个原核生物样本测得的6mA和5mC数据 为了尽可能排除原核DNA污染的干扰,作者还特意设计了针对原核生物16S rRNA的引物对样本进行RT-PCR,并尝试检测来自无菌小鼠DNA样本和HEK 293T

    1.1K10发布于 2020-03-04
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