SQANTI 3 主要设计用来完成两个同等重要的任务 (图2): 1.长读序列定义的转录组分类和质量控制(SQANTI3 QC)。 然而,最近我们在SQANTI 3 工作流程中加入了最后一个步骤(SQANTI3 rescue): 3.参考转录本的补救(SQANTI3 rescue)。旨在通过参考基因组注释去除artifacts。 通过运行SQANTI3 rescue程序,SQANTI 3 将选择已经被去除的aritfacts可信对应的参考转录本,并将它们添加回过滤后的转录组中。 一、SQANTI3 v5.2 安装 SQANTI3的下载 $ wget https://github.com/ConesaLab/SQANTI3/archive/refs/tags/v5.2.tar.gz $ tar -xvf v5.2.tar.gz SQANTI3的conda环境创建 $ cd SQANTI3 $ conda env create -f SQANTI3.conda_env.yml $
转录本分类与提取: 为了进一步对这些转录本进行系统性分类(如已知、新异构体、新基因座等),我们可以利用SQANTI3工具。 SQANTI3会将IsoQuant输出的GTF文件与参考基因组注释进行详细比对,为每个转录本打上精确的分类标签。
Pigeon基于SQANTI3开发,其输出与单细胞Seurat软件下游分析兼容。 UHRR.collapsed.sorted.gff human_ref/GRCh38.sorted.gtf human_ref/GRCh38.fa 测序聚类所得的转录本根据参考基因组注释文件进行以下分类(图5),分类标准参照SQANTI3
关于数据分析,采用SQANTI3软件对异构体进行分类,并配合IsoQuant深入分析基因和转录本表达水平(2)。感兴趣自己分析的小伙伴请参考我写的详细教程。 全长转录组 | Iso-Seq 三代测序数据分析流程 (PacBio) (3)-- SQANTI3 v5.2 全长转录组 | 三代全长转录组分析流程(PacBio & ONT )-- IsoQuant
使用SQANTI3 v1.6.1(基于GENCODE v34)进行转录本注释、分类和质量评估,并通过Fusionseeker v1.0.1检测基因融合。