2.1AninnermembranecomplexproteinIMC1ginPlasmodiumbergheiisinvolvedinasexualstageschizogonyandparasitetransmission▲目标蛋白在疟原虫不同发育阶段的表达谱与亚细胞定位分析(A)Westernblot (E)细胞组分分离Westernblot检测蛋白溶解性。 2.2PlasmodiumbergheiIMC1jinteractswithδ-tubulintoorchestratesubpellicularmicrotubuleorganizationinookinetes▲目标蛋白在疟原虫各发育阶段的表达特征、亚细胞定位及膜组分溶解性分析(A)Westernblot
▲通过免疫荧光检测ZO-1和Occludin表达、Westernblot分析NF-κB信号通路蛋白磷酸化水平、qRT-PCR检测促炎细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达,综合证实IKK ▲通过GSEA富集分析M1EV处理MV3细胞后炎症相关通路的富集情况、多种受体抑制剂筛选、以及IKK-16干预后qRT-PCR检测CXCL8和IL1B表达变化,结合转录因子预测分析及Westernblot ▲通过Westernblot检测LOX-1、总NF-κBp65、磷酸化NF-κBp65、ICAM-1和VCAM-1蛋白表达水平及定量分析,证实IKK-16可显著抑制ox-LDL诱导的TAECs中NF-κB ▲通过Westernblot检测NANOG和KLF4蛋白表达及定量、共聚焦显微镜观察NANOG亚细胞定位与荧光强度定量,以及STRING蛋白互作网络分析,综合证实IKK-16通过抑制NF-κB信号通路可显著下调
(B)Westernblot及定量:褪黑素剂量依赖性下调p-JNK、p-p44/42,上调p-p38;Tps显著抑制三种MAPK磷酸化,β-actin为内参。 针对Akt活化位点的分析表明,Melatonin促进了Thr308与Ser473的磷酸化,其中Thr308在平面表面免疫分析与Westernblot中均表现为统计学显著升高。 induceshumanhepatomacellapoptosisthroughCOX-2downregulation▲度浓度褪黑素对衣霉素(TM)诱导内质网应激通路蛋白ATF-6、IRE-1、PERK表达的调控(A)Westernblot
TargetingSmallMoleculeswithAnti-InfluenzaEffectsThroughMachineLearningandExperimentalValidation▲通过H1N1病毒感染小鼠模型,监测体质量变化与生存率、检测肺指数与肺组织病毒载量、观察肺组织H&E染色病理变化及Westernblot Westernblot显示Everolimus处理组病毒蛋白表达减弱,指示其有效抑制病毒复制。 肺部病毒载量随Everolimus剂量升高而显著下降,该趋势并经Westernblot结果一致支持。
▲通过Westernblot检测LIMK1和STAT3蛋白表达及磷酸化水平,并结合免疫荧光染色观察LIMK1的亚细胞定位与表达强度,综合证实Costunolide可下调LIMK1蛋白表达并调控STAT3 进一步的分子对接与WesternBlot证据表明,Costunolide可能直接与LIMK1结合,抑制其磷酸化,从而抑制肿瘤细胞迁移。 分子对接和WesternBlot证据表明其可能直接结合LIMK1,抑制其磷酸化,从而抑制肿瘤细胞迁移。
就肝细胞凋亡信号而言,LPS/D-GalN引起的caspase-3、caspase-8与caspase-9活性升高,被Stattic显著逆转;同时,Westernblot结果显示,Stattic显著抑制了 hTERT-HPNE细胞的活性;(E)10μMStattic处理48h后PANC-1与BxPc-3细胞的形态学变化;(F–G)克隆形成实验检测Stattic对PANC-1与BxPc-3细胞增殖的影响;(H–I)Westernblot Stattic(T6308)在本研究中作为针对STAT3磷酸化的抑制剂使用,研究者在加入针对JNK、CREB和STAT3的抑制剂(其中STAT3对应为Stattic)条件下进行了STAT3与p-STAT3的Westernblot
抑制克隆形成的影响;(B)BUB1shRNA对FDI-6诱导凋亡的影响;(C)BUB1shRNA对FDI-6诱导DNA损伤的影响;(D)BUB1shRNA对FDI-6所致G2/M期阻滞的影响;(E–F)Westernblot 检测BUB1shRNA与FDI-6对DNA修复及细胞周期相关基因表达的影响;(G–H)免疫荧光及Westernblot检测BUB1shRNA与FDI-6对干性标志物(CD44、CD133、SOX2、OCT4 皮肤内皮细胞经FDI-6处理后Dab2与VEGFR2免疫荧光代表性图像,标尺=50μm;(B)FDI-6抑制Dab2表达的机制示意图;(C)A图中免疫荧光强度的定量分析(n=3,mean±SD,t检验);(D)Westernblot 检测常糖或高糖条件下VEGFA诱导的VEGFR2近端信号通路磷酸化水平;(E)D图的定量分析(n=3,mean±SD,单因素ANOVA);(F)Westernblot检测FDI-6对VEGFA诱导的VEGFR2
(A)Westernblot检测SR140333处理不同时间后c-Myc蛋白表达水平,GAPDH为内参;(B)过表达c-Myc与空载对照组细胞在梯度浓度SR140333干预下的活力曲线,附图验证过表达效率 (A-B)shRNA敲低NSUN2后Westernblot与qPCR检测NSUN2、COL2A1、MMP13、p21、TNF-α蛋白及mRNA表达;为统计学显著差异。 (a)细胞诱导分化第1、3、5、7天镜下迁移与形态变化,标尺50μm;(b)成熟OB与OCY光镜形态,标尺100μm;(c)Westernblot检测骨细胞特异性标志物E11蛋白表达及定量统计,β-actin
▲通过Westernblot及ChIP-PCR检测证实,MDL-800可激活SIRT6去乙酰化酶活性,下调H3K9ac和H3K56ac在Mmp9启动子区的富集水平,从而在转录水平抑制MMP9表达。 ▲通过剂量反应曲线、Westernblot检测H3K9ac和H3K56ac水平、结晶紫染色及活细胞成像检测细胞活力与增殖、Transwell迁移实验、NSG小鼠异种移植瘤模型及Ki67与H3K9ac免疫组化染色 ▲通过Westernblot及RT-qPCR检测证实,MDL-800可在SIRT6活性被抑制或过表达的条件下,仍显著下调PPARα、LIPIN-1及脂肪酸氧化相关基因(Ppara、Cpt1a、Acox1
(B)Westernblot:PEDV感染上调糖酵解关键酶GLUT1、HK2、PFKM、PFKFB3、LDHA及病毒N蛋白,β-tubulin为内参。 (D)Westernblot检测蛋白表达,β-actin为内参,TED-OF组GPX4、SLC7A11蛋白含量升高。
▲通过Westernblot检测ACLY-K978乙酰化水平及HDAC2表达调控、免疫共沉淀与GST-pulldown验证ACLY与HDAC2的相互作用及结合区域、克隆形成实验与SynergyFinder ▲通过Westernblot检测PD-L1野生型及突变体(ΔCT、K262Q)蛋白表达,结合qRT-PCR检测IL-6和GM-CSFmRNA水平,并利用HDAC2抑制剂SantacruzamateA干预
4.蛋白表达检测表达完成后,可以通过多种方法对蛋白进行检测,例如:SDS-PAGE电泳分析WesternBlot荧光检测质谱分析这些方法可用于评估蛋白表达量以及蛋白质量。
2.1ZNF146accelerateslungadenocarcinomaprogressionthroughMDM2/p53andPHGDH/ferroptosis▲通过在A549和A427细胞系中进行恢复实验及凋亡检测,结合qRT-PCR和Westernblot ▲通过凋亡检测、克隆形成实验、EdU掺入分析、Westernblot、免疫组化及异种移植瘤模型等多种手段证实,Nutlin-3a可有效抑制CNPY3过表达所致结直肠癌细胞的增殖与成瘤能力,并上调p53表达
4.蛋白表达检测蛋白表达完成后,可以通过多种实验方法进行检测,例如:SDS-PAGE电泳分析WesternBlot荧光检测质谱分析这些方法可以用于评估蛋白表达量和蛋白质量。
细扒造假痕迹 具体而言,在这所有 412 篇论文中,Elisabeth 团队发现免疫印迹实验(Westernblot)条带都是非常有规律的间隔,呈哑铃状或蝌蚪状,没有任何通常的污迹。 除了 Westernblot 条带的问题,这些论文中的流式细胞结果和柱状图看起来也非常相似。 一般来讲,这种图形布局的相似性不一定是问题。
2020 年 1 月,Bik 与几名图像分析师共同发布了一份列有 412 篇论文的清单,在些论文中,Bik 的团队发现,其中免疫印迹实验(Westernblot)条带都是非常有规律的间隔,呈哑铃状或蝌蚪状 还有出版商表示,他们的新政策会要求作者在提交文章时提供 Westernblot 的原始数据。但编辑们意识到,即使是原始数据也可能被伪造,尤其是当 “论文工厂” 发现提出这样要求的编辑越来越多时。
2.1SRGN-mediatedreactivationoftheYAP/CRISPLD2axispromotesaggressivenessofhepatocellularcarcinoma▲通过划痕愈合实验(0、24、48小时)及Westernblot ▲通过Westernblot检测CHOP及p-eIF2α蛋白表达水平证实,Daurisoline可诱导表达AChE的NG108-15细胞发生内质网应激。
成骨诱导分化实验流程示意图:骨髓间充质干细胞(BMSCs)在成骨诱导培养基(OM)中培养,分别加入FP、Psr或FP+Psr(25μM),于第0、6、21天进行ALP染色、ARS染色、RT-qPCR、ELISA及Westernblot (I–J)ADCY9、PRKACB、p-CREB/CREB及ATP1A1蛋白表达的Westernblot检测及定量分析。
2.文献分享■2.1Erianinfacilitatespyroptosisinendometrialcancerviatargetingm6AreaderYTHDF1▲通过透射电镜、LDH释放检测、Westernblot 2.2DiscoveryoftheNaturalBibenzylCompoundErianininDendrobiumInhibitingtheGrowthandEMTofGastricCancerthroughDownregulatingtheLKB1-SIK2/3-PARD3Pathway▲通过UALCAN数据库分析、生存曲线、免疫组化及Westernblot
比如,仅仅WesternBlot图中GAPDH对照组的图谱,就似乎存在重复使用,而且不止和一篇文章重复。 而在这些相互关联的论文中,同样还涉及到3个课题组的3个国自然基金项目和多个省级基金项目。